分光光度计(另一个名称:吸光度微孔板读板仪)是一种能够检测和量化某一波长的光被微孔板中存在的液体样品吸收/透射的光子量的仪器。
与荧光和发光相反,吸光度检测是用光学密度(OD)量化的绝对测量。OD定义为落在探头的光的强度与穿过探头的光的强度之间的对数比率。或者,也可以使用透射率,即通过样品的部分光。
分光光度计,也称为分光光度微孔板读板仪,用于各种领域的不同应用,如生命科学学术研究、药物发现和筛选、临床实验室、合成生物学和食品或水质监测。
与标准分光光度计(一次测量一个比色皿)相比,微孔板读板仪可以以更高的处理通量进行相同的吸光度测定。它可以在几秒内测量一个完整的96孔微孔板,或在几分钟内测量384或1536孔板。
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什么是分光光度计?
从光学角度来说,分光光度计是一种相当复杂的仪器。由于信号的性质,这些微孔板读板仪需要激发光源、用于选择入射波长的光学器件、检测器和参考通道。
用一定强度的光照射样品。照射到探针(有色基团)的总光强度由预先测量的参考通道进行标定。光检测器相对于光源位于微孔板的对面。它测量通光探针的总光强度以及波长。没有通过检测器的光则被吸收。
测量的透射光量通常可用于计算感兴趣分子的浓度,因为吸收的光量与其浓度有关(比尔-朗伯定律)。或者,可以使用标准曲线和未知浓度的样品。这种方法可以通过ELISA对核酸、蛋白质和特定分子进行定量。
分光光度计可作为独立的专用酶标仪使用,或作为多功能酶标仪的一部分,与荧光强度和/或发光检测相结合。
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如果您正在市场上购买新的分光光度计(单功能或多功能),有几个因素需要考虑,因为仪器的性能会显著影响研究数据的质量。
波长选择
分光光度计必须具备选择波长的能力,这取决于使用的检测器类型。
通常使用两种不同类型的检测器:光电倍增管(PMT)或电荷耦合器件(CCD)分光计。
基于PMT的酶标仪需要在光源和孔之间使用波长选择工具。滤光片或光栅在光被发送到探针(有色基团)之前选择所需的波长。这样,只有所需波长的光透射通过,到达PMT,并被量化。
为了扫描光谱或波长范围,基于PMT的酶标仪需要光栅。光栅选择所需的波长,并根据机械运动顺序测量它们。对于多个离散波长的测量,需要使用不同滤光片或光栅扫描进行多次单次测量。
基于CCD分光计的酶标仪不需要波长选择工具。分光计将通过探针(有色基团)传输的光中存在的不同波长进行分离,引导到CCD检测器上。与光栅不同,它可以同时捕捉所有波长的强度。通过这种方式,可以在短时间内获取单个或多个离散波长的光谱,因为不需要像光栅那样的机械扫描。
如果您的分析或应用需要光谱采集,CCD分光计比光栅快得多,因为不需要机械光谱扫描。
BMG LABTECH单功能和多功能仪器配备有用于吸光度测量的UV/vis分光计。可在不到1秒/孔的时间内捕获从220nm到1000nm的全波段光谱。
兼容的微孔板格式
通常,在96孔板中测量基本发光测定。然而,如果您有多个样品和/或希望节省宝贵的试剂或时间,也可以使用384孔和1536孔格式。只需确保您选择的化学发光酶标仪能够读取您计划使用的微孔板格式。此外,吸光度、荧光和发光检测需要不同的板类型。使用高密度微孔板时,还应考虑光串扰。
振荡和孵育
在寻找合适的分光光度计时,你应该考虑你的研究性质和你想要进行的分析。通常,振荡和孵育是两个重要特征。当在稳定温度(例如37°C)下进行酶分析时,孵育至关重要。多种振荡选项让混合更理想。对于细菌或酵母(OD600)的细胞生长测定等应用,微孔板振荡对于良好的氧合和随后的快速细胞复制至关重要。
与比色皿的兼容性
传统上,吸光度测量是在标准化光程为1cm的比色皿中进行的。在微孔板中,光程取决于体积和板格式。如果测量水溶液,则可以使用水的波峰光程校正对微孔板测量进行归一化。尽管有此选项,但对于您的研究,您可能偶尔仍需要在比色皿中进行测量,请确保所选的酶标仪具有集成的比色皿端口(如SPECTROstar Nano),或用于水平测量比色皿的适配器(如LVis板)。
数据分析软件
通常,运行酶标仪的软件是软件包中被低估的一部分。对于某些酶标仪,软件仅控制检测过程并提供原始数据输出。在其他情况下,它可以执行复杂的数据分析。
吸光度测定最有用的计算功能包括自动空白扣除、基于ELISA测定标准曲线或比尔-朗伯定律自动计算浓度、260/280比值、光程校正和酶常数(如Km和Vmax)。
在BMG LABTECH软件包中,预设了最常见的检测类型的专用分析模板。通过这些专用解决方案,只需单击鼠标即可进行数据采集和分析,使研究人员能够快速轻松地进行实验。
BMG LABTECH的分光光度计
可以在多功能酶标仪PHERAstar FSX、CLARIOstar Plus、VANTASTAR、FLUOSTAR和SPECTROstar Omega上以及单功能SPECTROstar Nano上进行吸光度检测。
BMG LABTECH是第一家使用UV/vis分光计代替滤光片或光栅进行吸光度检测的公司。在高功率氙闪光灯照射探针(有色基团)后,BMG LABTECH的超快UV/vis分光计会收集整个光谱,而不是特定波长。它能在每孔不到1秒的速度以1–10 nm的分辨率捕获从220nm到1000 nm的所有波长。
另外,FLUOstar Omega也可提供基于滤光片的吸光度检测(基于PMT)。
Omega Series
SPECTROstar Nano
分光光度计可以应用在哪些分析?
吸光度是生命科学应用中最流行的检测模式之一。相应的,市场上有许多试剂盒和试剂可通过分光光度计作为单功能或多功能仪器来用于不同的应用和分析类型。一些比色测定法已适用于微孔板或已直接开发用于酶标仪。
分光光度计最常见的应用之一是在260nm处进行DNA/RNA定量。也可通过酶联免疫吸附试验(ELISA)定量溶液中的特定蛋白质。几种比色法也可用于蛋白质定量。在我们的博客文章“Protein measurement: find a suitable method”中,您可以找到蛋白质定量分析的详细方法,如Bradford、BCA和一些有帮助的小诀窍。
分光光度计的另一个应用是通过检测“600nm的光密度”(OD600)或通过比色法来检测细菌和酵母的细胞生长或细胞活力。
使用BMG LABTECH分光光度计的检测示例:
以下是在BMG LABTECH酶标仪上进行的吸光度检测示例:
以下是在BMG LABTECH酶标仪上进行的吸光度检测示例:
为什么选择BMG LABTECH分光光度计?
BMG LABTECH专门生产微孔板读板机,拥有超过30年的微孔板读板技术专业知识。这些知识在我们的仪器所提供的结果中显而易见——这是您实验室中唯一重要的因素!BMG LABTECH用户可以完全信赖BMG LABTECH的读板机拥有绝佳的灵敏度、速度和灵活性。此外,我们的多模式微孔板读板机是为了能够提供长期最佳性能而开发的。我们的仪器是在德国开发、生产和测试的,并且非常坚固可靠。
选购您所需要的
基于模块化设计,我们所有的荧光微孔板读板机都可以配备不同的检测模式,并涵盖多种应用。其他功能可以随时升级。这保证了你留有选择你后续需要的功能可能性,即使该功能在购买机器时并没有选配。
全方位服务和支持
我们努力为您提供最好的客户服务。所有销售区域代表都是训练有素的技术专家,能够支持硬件、软件和大多数应用程序问题。同时我们的应用专家团队为最复杂的应用程序提供专业的解决方案。
多用户软件包
我们所有的仪器都配有多用户软件包,可以根据用户的需要安装在任意数量的计算机上,而无需购买许可证。在购买微孔板读板机后的前12个月内,我们的软件更新是免费的。