荧光酶标仪的基本信息
什么是荧光酶标仪?
荧光酶标仪(又称:荧光微孔板读板仪)是一种能够检测和量化微孔板中存在的荧光样品在特定波长的光激发下发出的光子的设备。
荧光酶标仪通常用于荧光强度和FRET检测。而其他基于荧光的检测模式,如荧光偏振或时间分辨荧光和TR-FRET,只能偶尔检测,灵敏度很低,或者完全不能通过单功能荧光酶标仪检测。为了覆盖这些检测模式以及吸光度和发光,通常需要多功能酶标仪。
荧光酶标仪通常用于荧光强度和FRET检测。其他基于荧光的检测模式,如荧光偏振或时间分辨荧光和TR-FRET,只能偶尔检测,灵敏度很低,或者完全不能通过单功能荧光酶标仪检测。因此,为了覆盖这些检测模式以及吸光度和发光,通常需要多功能酶标仪。
荧光酶标仪通常包含光源、用于选择激发光的光学系统(即滤光片和/或光栅)、用于选择发射光的第二光学系统以及检测器,通常是一个或多个光电倍增管(PMT)。它们将荧光或发光产生的光子转换成电,然后由酶标仪进行量化。这个过程的输出就是用来量化样本。
与吸光度相反,荧光检测不是绝对测量。荧光信号的强度通常与其他测量值或仪器的参考测量值相关。因此,荧光酶标仪以相对荧光单位(RFU)测量样品发出的光信号。
荧光酶标仪可作为独立单元使用,或作为多功能酶标仪的一部分,与吸光度和/或发光检测相结合。
荧光酶标仪可用于各种领域的不同分析和应用,如生命科学学术研究、药物发现和筛选、临床实验室、合成生物学和食品或水质监测。
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如果您正在市场上购买新的荧光酶标仪(单功能式或多功能),有几个因素需要考虑,因为仪器的性能会显著影响您的研究结果的质量。
灵敏度
出于定量目的,荧光酶标仪通常比吸光度读数器提供更高的灵敏度。此外,具有更好灵敏度的荧光酶标仪将提供具有更好统计数据、更少重复之间的可变性以及更大响应和不响应样本之间的δ(距离)数据。此外,更好的灵敏度将允许您减少用于获得高质量结果的试剂和/或样品的数量,从而降低实验成本。
动态范围
在荧光强度检测中,样品通常覆盖广泛的浓度范围。用荧光酶标仪测量的信号可能会跨越从极弱到极强的各种信号强度。此外,酶促或基于细胞的动力学测定的样品通常很难预测其信号强度,因为在动力学测定过程中,随着时间的推移,信号强度是逐渐累积的。
在这些情况下,可能很难用同一个设置在一次测量中获取所有信号。极强信号的样品可能使酶标仪的荧光检测器饱和。而极弱信号的样本可能无法从空白中分辨出来。
具有大的动态范围允许荧光酶标仪在一次检测中采集高度分散的样品,避免了为找到正确的稀释与荧光增益比而进行的多次试错测量导致的试剂浪费和时间浪费。
PHERAstar FSX, CLARIOstar Plus和VANTAstar上的动态范围扩展技术提供了市场上可能的最大动态范围(8个数量级浓度),并可以在单次检测中自动测量极弱和极强的信号,无需调整。
波长选择
荧光酶标仪中的波长选择能力对于激发和发射都是强制性的。这有助于减少来自样品和微孔板的光散射或自发荧光引起的非特定背景或噪声。
滤光片或光栅都可用于波长的选择。滤光片通常更灵敏,而光栅则更灵活。此范例的一个例外是CLARIOstar Plus和VANTAstar上提供的线性可变滤光片(LVF)光栅系统。LVF光栅具有类似滤光片的性能,使CLARIOstar Plus成为市场上最灵敏的基于光栅的酶标仪。LVF光栅可用于荧光强度和发光检测。此外,LVF光栅具有获取激发光谱或发射光谱的扫描能力。
此外,在荧光酶标仪上同时检测两个发射通道的能力对FRET测定非常有益。该功能将测量时间减半,并减少数据变异度。PHERAstar FSX上提供同时双发射(SDE)检测,LUMIstar Omega和FLUOstar Omega上也有此选项。
兼容的微孔板格式
通常在生命科学研究中,在96孔微孔板中进行基本荧光测定。然而,如果您有多个样品和/或希望节省宝贵的试剂或时间,也可以使用384孔和1536孔格式。只需确保您选择的荧光酶标仪能够读取您计划使用的微孔板格式。此外,吸光度、荧光和发光检测需要不同的微孔板类型。
试剂注射器
在选择荧光酶标仪时,您应该考虑要运行的分析的性质。对于酶动力学测定或基于细胞的实时反应,使用试剂注射器可能是有益的。通过手动将试剂移液到微孔板中,您可能会有丢失反应重要数据的风险。特别是对于快速反应,您正在寻找的信号在您检测到之前可能已经消失。我们配备有试剂注射器的荧光酶标仪可以同时注入试剂和检测信号,然后移动到下一个检测孔。
环境控制
如果您的研究需要长时间基于活细胞的分析,并且您不想在荧光酶标仪和培养箱之间来回移动微孔板,请确保您选择的读板仪能够控制其内部气体环境。
Omega系列、VANTAstar和CLARIOstar Plus可配备我们的大气控制单元(ACU)。ACU为任何具有活细胞的应用程序提供了理想的环境。ACU独立调节酶标仪仓内的O2和CO2气体水平。结合振荡和温度孵育,ACU为任何基于细胞的测定(从标准细胞生长到缺氧测定)提供了真正的“无人看管”解决方案。
数据分析软件
通常,运行酶标仪的软件是软件包中被低估的一部分。对于某些读板仪,软件仅控制检测过程并提供原始数据输出。在其他情况下,它可以执行复杂的数据分析。
一个全面、易于使用和灵活的软件可以使生活更轻松,简化检测和数据分析,从而使您能够充分利用仪器。
吸光度测定最有用的计算功能包括自动空白减法、基于ELISA测定标准曲线或比尔-朗伯定律自动计算浓度、260/280比值、路径长度校正和酶常数(如Km和Vmax)。
在BMG LABTECH软件包中,预设了最常见的检测类型的专用分析模板。通过这些专用解决方案,只需单击鼠标即可进行数据采集和分析,使研究人员能够快速轻松地进行实验。
CLARIOstar Plus
VANTAstar
Omega Series
荧光酶标仪可以测量哪些分析?
荧光强度是生命科学中最流行的检测模式之一。因此,市场上有许多试剂盒和试剂可用于荧光酶标仪(无论是单功能式还是多功能仪器)覆盖的各种不同的测定类型。
荧光强度的常见应用包括DNA/RNA定量、钙测定(通量和信号)、酶活性、基因表达、GPCR的第二信使信号、蛋白质-核酸相互作用、色氨酸定量、分子信标、废水分析生物传感器等。
基于细胞的应用包括细胞凋亡测定、细胞增殖、转染效率和细胞毒性。
蛋白质相互作用可以通过荧光共振能量转移(FRET)检测。FRET是一种基于供体和受体之间能量转移的双染料荧光检测方法。如果供体和受体非常接近(10-100Å),供体荧光团的激发将能量转移到受体荧光团,受体荧光团将发射光而不被直接激发。
荧光强度/FRET测量示例:
以下是在BMG LABTECH荧光酶标仪上进行的荧光强度和FRET测量的示例:
- AN 301: Simultaneous detection of GPCR second messengers in living cells
- AN 293: Moss cells as expression system for biopharmaceuticals
- AN 253: Real-time calcium flux measurements in iPSC derived 3D heart tissue
参见荧光强度应用指南的完整列表。
为什么选择 BMG LABTECH 荧光酶标仪?
BMG LABTECH专门生产微孔板读板机,拥有超过30年的微孔板读板技术专业知识。这些知识在我们的仪器所提供的结果中显而易见——这是您实验室中唯一重要的因素!BMG LABTECH用户可以完全信赖BMG LABTECH的读板机拥有绝佳的灵敏度、速度和灵活性。此外,我们的多模式微孔板读板机是为了能够提供长期最佳性能而开发的。我们的仪器是在德国开发、生产和测试的,并且非常坚固可靠。
选购您所需要的
基于模块化设计,我们所有的荧光微孔板读板机都可以配备不同的检测模式,并涵盖多种应用。其他功能可以随时升级。这保证了你留有选择你后续需要的功能可能性,即使该功能在购买机器时并没有选配。
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我们努力为您提供最好的客户服务。所有销售区域代表都是训练有素的技术专家,能够支持硬件、软件和大多数应用程序问题。同时我们的应用专家团队为最复杂的应用程序提供专业的解决方案。
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我们所有的仪器都配有多用户软件包,可以根据用户的需要安装在任意数量的计算机上,而无需购买许可证。在购买微孔板读板机后的前12个月内,我们的软件更新是免费的。