化学发光酶标仪基本信息
化学发光酶标仪(其他名称:发光微孔板读板仪)是一种能够检测微孔板中化学、生物化学或酶反应发出的光子并对其进行量化的设备。发光检测不像吸光度那样是绝对测量。信号强度通常与其他测量值或仪器的参考测量值相关(如荧光)。因此,化学发光酶标仪以相对光单位(RLU)量化样品发出的光信号。
化学发光酶标仪用于各种领域的不同应用,如生命科学学术研究、药物发现和筛选、临床实验室、合成生物学和食品或水质监测。
什么是化学发光酶标仪?
与荧光酶标仪相比,化学发光酶标仪在光学上是相当简单的仪器。由于发光信号的性质,发光酶标仪既不需要激发光源,也不需要用于激发波长选择的光学器件(如吸光度或荧光检测所需)。它们只需要一个读取室,一个将光信号从样品带到检测器的光学系统,一个检测器(光电倍增管,PMT),可能还有一个选择发光(发射)波长的光学系统。
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发光酶标仪可作为独立的专用酶标仪(化学发光酶标仪)或多功能酶标仪的一部分。
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如果您正考虑购买新的化学发光酶标仪,有几个因素需要考虑,因为仪器的性能会显著影响检测结果的质量。
灵敏度
发光通常由生物化学或化学反应产生,不需要激发光。因此,与吸光度或荧光相比,它通常提供更高的灵敏度。与荧光强度相比,非特异性背景或噪声信号极为有限,因为没有激发过程可以触发来自样品和微孔板的光散射或自发荧光。
然而,具有更好灵敏度的发光酶标仪将提供具有更好统计数据、更少重复之间的可变性以及更大响应和不响应样本之间的δ(距离)的数据。此外,更好的灵敏度将允许您减少用于获得高质量数据的试剂和/或样品的数量,从而降低成本。
动态范围
微孔板中的发光反应通常基于向孔中添加基质以启动酶促反应。一旦反应开始,底物会被酶代谢,反应就会耗尽,不能再次触发,除非在新的板中使用新的试剂和样品。因此,要获取所有样品的信号,这些样品必须立即在微孔板上用化学发光酶标仪进行测量。这避免了必须重复化验和消耗更多试剂的风险。
如果在单个微孔板上有跨越大范围信号强度的样本,则可能很难在一次测量中用同一个设置获取所有样本信号。极强信号的样品可能会使酶标仪的发光检测器饱和。极弱信号的样本可能无法从空白中分辨出来。
具有大的动态范围允许发光酶标仪在一次检测中采集高度分散的样品,避免了为找到正确的稀释与荧光增益比而多次试错测量导致的试剂浪费和时间浪费。PHERAstar FSX, CLARIOstar Plus和VANTAstar上的动态范围扩展技术提供了市场上可能的最大动态范围(8个数量级浓度),并可以在单次检测中自动测量极弱和极强的信号,无需调整。
波长选择
化学发光酶标仪中的波长选择功能(滤光片或光栅)不是强制性的(如吸光度或荧光检测),尤其是在检测基本发光测定时。然而,取决于应用,特别是对于具有多个信号的发光测定,可选择发射波长是有益的,滤光片或光栅可用于此。当开发新的分析或检测多个发光信号时,此选项非常有用。此外,它有助于通过减少背景噪声来优化分析。
滤光片通常更灵敏,而光栅则更灵活。此范例的一个例外是CLARIOstar Plus和VANTAstar上提供的线性可变滤光片(LVF)光栅系统。LVF光栅具有类似滤光片的性能,使CLARIOstar Plus成为市场上最灵敏的基于光栅的酶标仪。LVF光栅可用于荧光强度和发光检测。此外,LVF光栅具有发光扫描的能力。
此外,在化学发光酶标仪上同时检测两个发射通道的能力对BRET和NanoBRET分析非常有益。该功能将测量时间减半,并减少数据变异度。LUMIstar Omega和PHERAstar FSX上都可同时进行双发射(SDE)检测。
兼容的微孔板格式
通常,在96孔板中测量基本发光测定。然而,如果您有多个样品和/或希望节省宝贵的试剂或时间,也可以使用384孔和1536孔格式。只需确保您选择的化学发光酶标仪能够读取您计划使用的微孔板格式。此外,吸光度、荧光和发光检测需要不同的板类型。使用高密度微孔板时,还应考虑光串扰。
光串扰
在测量过程中,来自微孔板上相邻孔的光信号也被检测器读取时,就会发生光串扰。这会导致结果掺假。在使用高密度板(384孔或更高)时,串扰变得尤为明显。检测器可以通过两种方式读取串扰光,一种是从孔的顶部,另一种是来自微孔板的塑料壁。
高端化学发光酶标仪,如CLARIOstar Plus、VANTAstar和PHERAstar FSX,可以通过物理阻挡来自相邻孔的光来避免这一因素。特定的算法可以计算通过塑料墙透射的光量,并将其从样本中减去。
闪光或辉光反应
在寻找化学发光酶标仪时,应考虑要运行的分析的性质。根据其动力学,发光测定可分为闪光和辉光反应。闪光是一种短暂的反应,在很短的时间内(通常是几秒钟)发出非常明亮的信号。辉光发光则持续的时间较长。反应可以持续几分钟,但通常会发出不太强烈的信号。
任何化学发光酶标仪都可以检测辉光反应。闪光测定需要使用试剂注射器。通过手动将试剂移到微孔板的孔中,您可能会有失去反应峰值的风险,因为转瞬即逝的信号在您检测到之前可能已经耗尽。我们配备有试剂注射器的化学发光酶标仪可以自动注入试剂并检测孔的信号,然后移动到下一个孔。
试剂注射器也有利于双荧光素酶报告基因(DLR)测定。这里,通过化学发光酶标仪从单个样品中连续测量两种荧光素酶的活性,并报告目标基因的转录和转染对照。使用带有试剂注射器的化学发光酶标仪可在约4秒内完成两种测定。
BMG LABTECH的荧光读板机
可以在BMG LABTECH的专用化学发光酶标仪LUMIstar®Omega和包括PHERAstar®FSX、CLARIOstar®Plus、VANTAstarTM和FLUOstar®Omega在内的多功能酶标仪上进行发光检测。
我们所有的化学发光酶标仪都通过了双荧光素酶报告基因检测的认证,使用了发光优化的低噪音PMT(光电倍增管),并可配备高精度试剂注射器。
CLARIOstar Plus
VANTAstar
Omega Series
哪些分析可以用化学发光酶标仪测量?
作为单功能或多功能(包括例如吸光度和荧光检测)的化学发光酶标仪可以涵盖广泛的测定,包括酶促反应、双荧光素酶报告基因(DLR)、发光钙流和化学发光ELISA。
化学发光酶标仪也可用于分析细胞活力、细胞毒性和凋亡测定、信号通路和代谢。细胞中的支原体污染也可以通过发光测定来测量。
甚至邻近效应或蛋白质-蛋白质相互作用测定也可以通过BRET和nanoBRET测定来测量。
BRET(生物发光共振能量转移)是一种基于生物发光供体和荧光受体之间的共振能量转移的双报告发光检测方法。由于供体通过生物发光发射光子,荧光激发是非必要的。
发光检测示例:
以下是在BMG LABTECH化学发光酶标仪上进行的发光测量示例:
- AN 300: Verifying SPARCL performance on the CLARIOstar equipped for reading at time of injection
- AN 271: Dual Luciferase Reporter (DLR) assay certification
- AN 266: Promega's multiplexed cell viability and apoptosis assays
参见发光应用指南的完整列表。
为什么选择 BMG LABTECH 化学发光酶标仪?
BMG LABTECH专门生产微孔板读板机,拥有超过30年的微孔板读板技术专业知识。这些知识在我们的仪器所提供的结果中显而易见——这是您实验室中唯一重要的因素!BMG LABTECH用户可以完全信赖BMG LABTECH的读板机拥有绝佳的灵敏度、速度和灵活性。此外,我们的多模式微孔板读板机是为了能够提供长期最佳性能而开发的。我们的仪器是在德国开发、生产和测试的,并且非常坚固可靠。
选购您所需要的
基于模块化设计,我们所有的荧光微孔板读板机都可以配备不同的检测模式,并涵盖多种应用。其他功能可以随时升级。这保证了你留有选择你后续需要的功能可能性,即使该功能在购买机器时并没有选配。
全方位服务和支持
我们努力为您提供最好的客户服务。所有销售区域代表都是训练有素的技术专家,能够支持硬件、软件和大多数应用程序问题。同时我们的应用专家团队为最复杂的应用程序提供专业的解决方案。
多用户软件包
我们所有的仪器都配有多用户软件包,可以根据用户的需要安装在任意数量的计算机上,而无需购买许可证。在购买微孔板读板机后的前12个月内,我们的软件更新是免费的。