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酶标仪的基本信息
什么是酶标仪?
酶标仪是一种实验室仪器,用于测量微孔板孔内的化学、生物或物理反应、性质和分析物。微孔板由很多小孔组成,反应分别在小孔中进行。在微孔板中,这些反应将分析物的存在或生化过程的进展转化为光信号。酶标仪检测这些信号,从而量化成感兴趣的参数。
生命科学和制药行业的科学家努力通过使用能够节省时间的产品或仪器来改进常规实验室流程和效率。酶标仪可以在几分钟甚至几秒钟内处理多达3456个样本。酶标仪有助于减少操作时间并节省试剂成本,使研究人员能够将更多时间用于数据分析并获得可靠的研究成果。
酶标仪可用于?
酶标仪用于定量微孔板中的生物和化学分析。如今,大量试剂盒的生产使得酶标仪能够在不同领域和许多不同的应用中使用。除了生物、细胞、生物化学、药物研究和药物研发,无论是在学术环境还是工业环境中,酶标仪也用于药物研发、环境研究以及食品或化妆品行业。
酶标仪的工作原理
酶标仪检测微孔板中的样品产生的光信号。这些样品的光学性质是生物、化学、生化或物理反应的结果。不同的分析反应导致用于分析的光学变化不同。吸光度、荧光强度和发光是全世界实验室中最流行和最常用的检测模式。此外,荧光偏振、时间分辨荧光和AlphaScreen®等高级模式也可用于酶标仪。
基于微孔板的测量是检测由样本产生、样本转换或通过样本传输的光信号。在酶标仪中,信号由检测器测量,通常是光电倍增管(PMT)。PMT将光子转换成电,然后由酶标仪进行量化。这个过程的输出是用来量化样本的数字。
根据反应过程中光信号变化的性质以及检测模式,微孔板上的样品可能需要被特定波长的光激发。这种光通常由宽带氙闪光灯提供。为了仅通过特定波长的光激发样品,由灯产生的光由特定激发滤光片或光栅来进行选择。在酶标仪上,为了提高灵敏度和特异性,在发射/检测侧同样采用了滤光片或光栅。这些通常放置在微孔板和检测器之间。
你想在实验室里使用酶标仪吗?
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我想做哪些检测?
当需要购买酶标仪时,大部分原因是已有一些已知的应用需要进行检测。然而,更多地关注以下问题是有意义的,以便为实验室找到合适的和符合未来发展的酶标仪。一方面,你必须进行基本的分析,以量化生物分子,如核酸和蛋白质,或细胞活力。对于所有这些应用,有几种基于不同原理、检测模式和灵敏度的解决方案。因此,提前了解所需的试剂盒和供应商或您想在酶标仪上使用的化学物质是非常重要。另一方面,有数千种测试可以回答特定的生物学问题。虽然可以使用基于微孔板的更简单的解决方案,但通常也可以通过繁琐的测试来解决这些问题。因此,在购买酶标仪之前,检查您的日常实验室工作并收集同事如何使用酶标仪的信息是一个基本步骤。或者,你可以找到无数关于酶标仪如何简化我们“研究领域”研究的建议。
我的检测需要哪种检测模式?
不同的检测结果不同,即使它们可能回答相同的生物学问题。如果您已经确定了试剂盒,您将在产品说明书中找到所需的检测模式。酶标仪中可用的检测模式及其典型用途如下所述。
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吸光度
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荧光强度(包括FRET)
荧光是光能的吸收及其转化为发射光,类似动能和热量。由于发射光的能量低于输入光,所以发射光总是具有更长的波长。能量吸收、能量转换和光发射的过程很快,发生在纳秒级的时间范围内。因此,荧光强度的检测在酶标仪中发生如下:用特定波长的光激发,同时检测较长波长的发射光。通过滤光片或光栅完成波长选择。荧光强度与荧光基团的浓度成线性,因此可用于定量荧光(或荧光标记)分子。当与感兴趣的分子相互作用以检测特定分子时,其他荧光强度应用采用荧光发射的变化或荧光的增加。荧光板酶标仪的典型应用如下:
细胞活力测定 Resazurin assay, Calcein-AM 聚集测定 Thioflavin T (RT-QuIC) 酶活性测定 4-methylumbelliferone (4-MU), NADH-based assays, 7-Amino-4-Methylcoumarin (AMC) 活性氧种类 H2DCFDA assay, DCF assay 核酸定量 Qubit assays, Quant-iT assays (e.g. PicoGreen) -
发光(包括BRET)
无需事先激发而发射的光被称为发光。生命科学实验中发光的产生是化学反应的结果,是自发的或需要酶催化。在自发发光反应中,需要存在基质以及共因子来产生光。对于依赖于酶的发光反应,功能酶是必不可少的。这种酶叫做荧光素酶。为了在酶标仪上测定发光实验的发射光,需要一个检测器。通常,所有来自孔的光都由透镜集成束并引导至检测器。因此,发光板酶标仪不依赖于滤光片或激发光源。对于双发射测定,波长选择通过滤光片或光栅完成。这种非常灵敏的检测模式用于以下研究:
细胞活力测定 CellTiterGlo 报告基因分析 Dual luciferase reporter assay 受体配体结合 BRET-based assays -
荧光偏振
另一种基于荧光的检测模式,使用偏振光来激发荧光分子。通过测量相对于激发偏振平面的平行和垂直平面中的发射来确定发射光的偏振变化。荧光偏振的变化是由分子量的差异引起的。小分子和轻分子快速移动并使荧光发射去极化,而大分子缓慢移动并保持荧光偏振。适合以下研究:
竞争性结合分析 核苷酸检测报告酶活性 Transcreener assays -
AlphaScreen
AlphaScreen(放大发光邻近均相测定)技术使用在红光(680nm)激发时能释放单线态氧的供体微珠。单线态氧分子最大可游离200nm并与硫辉石发生化学发光反应。进一步的能量转移导致受体微珠产生520和620nm之间的宽发光信号或具有离散波长的信号。如果供体微珠(单线态氧释放)和受体珠非常接近,则会发出发光信号,并可由酶标仪检测到。这些珠子通常由特异性结合同一分析物的抗体或与相互作用的分子偶联的抗体结合在一起。对于酶标仪上的AlphaScreen检测,680nm的激发与发光读数相结合,与激发相比,发光读数在时间上延迟。AlphaScreen通常用于研究以下高通量应用:
蛋白质、细胞因子定量 AlphaLISA assays 蛋白质磷酸化 Alpha SureFire assays 蛋白质-蛋白质相互作用 AlphaScreen assayss -
浊度测定法
浊度法是一种用于测量溶液中悬浮不溶性颗粒引起的浊度的技术。当光被引导通过含有悬浮固体颗粒的溶液时,光被透射、吸收和散射(被颗粒反射)。浊度法直接量化样品中不溶性颗粒散射的光的强度。浊度仪是一个包含一个光源、一个与光束成直角布置的检测器以及一个光学散射收集器的酶标仪。适合以下研究:
药物溶解度 微生物生长测定 -
时间分辨荧光
时间分辨荧光(TRF)是一种基于荧光的检测方法,需要在特定波长激发样品并在不同波长检测发射的荧光。与传统荧光强度相比,发射持续时间为毫秒,而不是纳秒。这是由于镧系元素是具有长寿命荧光特性的稀土元素。酶标仪测量发射信号的时间点比之于激发信号有延迟,避免检测背景和自发荧光。适用于以下应用:
代谢测定 soluble probes for extracellular acidification and oxygen consumption measurements 生物分子和蛋白质定量 Immunoassay, DELFIA -
TR-FRET
TR-FRET是一种将时间分辨荧光(TRF)与Förster共振能量转移(FRET)相结合的检测技术。TR-FRET主要用于分析结合反应和高通量药物筛选。FRET描述了两个荧光团之间的能量传递。转移取决于供体和受体之间的空间接近度以及供体发射和受体激发光谱之间的重叠。TR-FRET试剂盒包括HTRF、Lanthascreen、Transcreener和THUNDER,用于以下应用:
结合研究 TR-FRET-based assays
BMG LABTECH的单功能酶标仪
这些酶标仪只有一种检测模式(通常是吸光度、发光或荧光强度)。当已经明确仪器将仅用于一个应用时,这些酶标仪是最佳选择。这类任务通常是长期测定,无需进行其他测量。因此,一种检测模式就足够了。这类研究的例子有:需要一天或多天的微生物生长监测,或长达7天的硫黄素T实验。如果您可以在单一模式下执行所有分析,则单一检测模式酶标仪满足您的实验室要求。例如,使用吸光度酶标仪,您将能够测量酶活性、DNA和蛋白质的数量、细胞活力等。然而,您仅限于灵敏度或特异性可能低于采用其他检测模式的分析。如果您目前计划的应用仅基于一种检测模式,但您不确定未来会带来什么,请留意稍后可升级为多功能仪器的酶标仪。
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LUMIstar Omega
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SPECTROstar Omega
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NEPHELOstar Plus
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PHERAstar FSX
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CLARIOstar Plus
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VANTAstar
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Omega Series
通常使用哪种微孔板?
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6至96孔板
Image ©Greiner Bio-One GmbH
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384孔板
Image ©Greiner Bio-One GmbH
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1536和3456孔板
Image ©Greiner Bio-One GmbH
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LVis板
酶标仪的哪些质量特征最重要?
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灵敏度
具有高灵敏度的酶标仪允许您读取非常弱的信号强度,并在分析窗口内具有更好的信号分辨率。如果你的阴性对照和阳性对照很接近,这是最重要的。对于具有非常小的分析窗口的检测,必须使用高度灵敏的酶标仪。
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灵活性
如果您的需求在项目期间或项目之间发生变化,强烈建议使用提供多种可能性的酶标仪。考虑切换检测模式的能力,在顶部和底部读数之间轻松切换,或在吸收、荧光和发光模式中选择波长,而无需购买或安装滤光片。这些特征通常由基于光栅的多功能酶标仪提供。带有光栅的酶标仪还可以获取波长扫描。
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速度
建议使用具有高检测速度的酶标仪检测用于高通量筛选的高密度板(1536和3456孔板),或者需要高时间分辨率来监测的快速反应(例如第二信使信号)。
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预算是多少?
当决定购买酶标仪时,预算起决定作用。
酶标仪的价格取决于技术设备和设备可以检测的模式的数量。对于简单的基于滤光片的ELISA酶标仪,酶标仪的价格范围从2,500欧元/美元起步,对于具有多种检测模式和最佳技术的高端多功能酶标仪来说,酶标仪的售价范围可能会超过150,000欧元/美元,以实现最高灵敏度和最快读取时间。
但在选择时要小心,不要只考虑您当前的需求,还要考虑您未来的酶标仪需求。
随时关注升级酶标仪的可能性,使其具有附加功能或检测模式。如果您以后有机会升级,则无需为将来的应用购买额外的酶标仪。这不仅节省了金钱和实验室中的有用空间,而且还节省了您为适应新的酶标仪或品牌而必须花费的时间。
除了酶标仪本身的成本外,还要注意可能的额外隐性成本,例如服务、支持、软件更新和许可证或捆绑试剂的费用。
还要记住,尽管基于滤光片的酶标仪通常比基于光栅的仪器便宜,但您需要为不同的波长购买不同的滤光片。一定要考虑到这些成本。
为什么选择 BMG LABTECH 读板机?
BMG LABTECH专门生产微孔板读板机,拥有超过30年的微孔板读板技术专业知识。这些知识在我们的仪器所提供的结果中显而易见——这是您实验室中唯一重要的因素!BMG LABTECH用户可以完全信赖BMG LABTECH的读板机拥有绝佳的灵敏度、速度和灵活性。此外,我们的多模式微孔板读板机是为了能够提供长期最佳性能而开发的。我们的仪器是在德国开发、生产和测试的,并且非常坚固可靠。
一个质量标志是我们在已建立的科学平台“Select Science”上的产品排名,在该平台上,我们的客户给了我们4.7颗星(满分5.0颗星)。不要错过阅读我们的用户对酶标仪的评价。
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